接种后，把菌种瓶或袋放在20至28摄氏度培养室中培养。大球盖菇菌丝生长几天后，菌丝生长速度会逐渐缓慢，加速菌丝生长的方法是搅拌。用液体菌种接种的无菌麦粒培养基，每隔3至7天摇瓶一次，把菌丝摇断，可以刺激菌丝再生，能保证菌丝生长旺盛。
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